3.2.3. Изучение зависимости гибели клеток М. smegmatisот времени взаимодействия с хитозаном

0 ж11111

0              10              30              60              120

Время экспозиции, мин

Рис.7.

взаимодействии с хитозанами при 37°С и рН 6,8 в зависимости от времени

экспозиции (мин); 1-хитозанМг| 4 кДа, 2- хитозан Мл. 11 кДа, 3- хитозан Мл.

24 кДа.

Было показано, что достаточно 10 мин контакта хитозана с культурой М.

92

в концентрации 0,1% и хитозаном из восковой моли Galleriamellonellaс Мп от 7-177 кДа и СД 89% в концентрации 0,1%, рН 6,8 на качалке при температуре 37°С в течение 1 ч на качалке. После этого пробы титровали и высевали на чашки Петри с питательной средой. В качестве контроля брали бактерии, не обработанные хитозаном. По истечении 72 часов инкубации определяли количество КОЕ. Результаты гибели М. smegmatis представлены на рисунке 6.

100 -I

100 л

¦?

amp; бо

о^

ММ, кДа

Рис.6. Влияние хитозанов с различной Мг| на гибель клеток М. smegmatis(%

от общего количества клеток) через 1 ч при 37 °С и рН 6,8; а - крабовый

хитозан, б - хитозан из восковой моли.

На рис.6 видно, что процент гибели клеток М. smegmatisпосле 60 мин экспозиции при 37°С и рН 6,8 составлял 0-76% в зависимости от Мп, испытанных образцов хитозана. Наименьшей чувствительностью тестируемый штамм обладал к высокомолекулярным образцам хитозана с Мг| 96 и 177 кДа. В случае их действия гибель клеток микобактерий составляла 29% и 13%, соответственно. Высокомолекулярный крабовый хитозан с Мц 396 кДа в концентрации 0,1 % не обладал антибактериальным действием. Максимальной активностью в отношении клеток микобактерий обладали низкомолекулярные хитозаны с Mrj 4-11 кДа, процент гибели

91

клеток достигал 76%. Необходимо отметить, что тенденция увеличения антибактериальной активности хитозанов с уменьшением их Мг| сохранялась и при взаимодействии клеток М. smegmatisс образцами хитозана восковой моли.

Таким образом, на основании результатов проведенных опытов можно сделать вывод о том, что препараты низкомолекулярного хитозана краба с Мг| от 4-24 кДа и СД 85% и низкомолекулярные хитозаны восковой моли с Мл. 7 и 11 кДа и СД 89% эффективно действуют на клетки М. smegmatis, вызывая, практически, их полную гибель.