3.4.2. Ингибирование активности липолитических ферментов хитозаном в гетерогенных растворах, на границе раздела фаз

Зависимости начальных скоростей гидролиза оливкового масла липазами от концентрации субстрата в отсутствие и в присутствие ингибитора описываются уравнением Михаэлиса-Ментен, после линеаризации, которого в координатах Лайнуивера-Берка были определены максимальные скорости гидролиза и константы Михаэлиса Кт.

ПО

масла свиной панкреатической липазой от концентрации субстрата в отсутствие и в присутствие хитозана. Аналогичные зависимости получены и для липазы из проростков пшеницы и для липазы из С. rugosa.

Рис.16. График зависимостей в обратных координатах начальных

скоростей гидролиза оливкового масла свиной панкреатической липазой от

концентрации субстрата в отсутствии (1) и в присутствии ингибитора (2)

при рН 6,7 и 37°С.

Проекция прямых на ось абсцисс позволила определить, что хитозан является конкурентным ингибитором липолитических ферментов. Найденные из этих зависимостей значения молекулярных констант скорости, kcat и констант Михаэлиса, Кт представлены в таблице 20.

Таблица 20.

Кинетические константы реакции гидролиза оливкового масла липолитическими ферментами

Эффективность гидролазного действия панкреатической липазы на оливковое масло, выражаемая бимолекулярной константой кса/Кт, в 10 раз

111

выше, чем для растительной липазы, и в 5 раз выше, чем для липазы из С.

rugosa. Разница в эффективности гидролазного действия на субстрат между

панкреатической липазой и липазой из С.

Это обусловлено различиями в величинах как kcat, так и Км.

Из данных табл. 21 следует, что низкомолекулярный хитозан ингибирует

липолитическую активность, константы ингибирования Kj   изменяются в

пределах 70-160 мкМ, в зависимости от ингибируемого фермента.

Таблица 21. Константы ингибирования липолитических ферментов

низкомолекулярными хитозанами и моноглюкозамином

Значения констант ингибирования растительной липазы и липазы из С. rugosaодного порядка. Константа ингибирования хитозаном панкреатической липазы на порядок ниже и составила 77 мкМ. Увеличение констант ингибирования хитозаном растительной и грибной липаз по сравнению с константами, найденными при гидролизе водорастворимого субстрата, согласуется с данными о том, что при нахождении липолитических ферментов в зоне раздела фаз, липид - вода, эффективность связывания с ингибитором существенно увеличивается за счет значительного преобладания открытой конформации фермента.