КОРРЕЛЯЦИЯ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ С ЛИНЕЙНО-ВЕСОВЫМИ ПАРАМЕТРАМИ ОСОБЕЙ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ РЫБ

М.В. Чурова¹, О.В. Мещерякова¹, М.И. Шатуновский², Н.Н. Немова^{1 1}Учреждение Российской академии наук Институт биологии Карельского научного центра РАН, г.

² Учреждение Российской академии Институт проблем эволюции и экологии Им. А.Н. Северцова РАН, г. Москва, Россия e-mail:mchurova@yandex.ru Введение

Рост - важный аспект в оценке общего состояния популяции рыб и каждой особи в отдельно­сти. Существует много способов оценки роста рыб от традиционных и прямых измерений, таких как изменение длины, веса, к более современным, например, изучение уровня экспрессии генов. Исследования последних лет (Hevroy et al., 2006; Overturf, Hardy, 2001, Pelletier et al., 1995; Tripathi and Verma, 2004; Vinagre et al., 2008) показывают, что в оценке скорости роста рыб могут быть ис­пользованы активность ферментов энергетического и пластического обмена, экспрессия генов мио­зина и некоторых ферментов, показатель РНК/ДНК.

В данной работе мы изучали взаимосвязь линейно-весовых характеристик особей форели, ря­пушки, беломорки с уровнем их некоторых биохимических показателей. Определялись следующие показатели: соотношение РНК/ДНК, уровень экспрессии генов тяжелой цепи миозина и цитохром с оксидазы (только для форели), активность некоторых ферментов углеводного и энергетического об­мена.

Материалы и методы

Исследовали особей разных возрастных групп ряпушки Coregonus albula Ь.(оз. Сямозеро, Республика Карелия), беломорки Clupea Harengus pallasi natio maris-albi Berg (Белое Море), форели Parasalmo mykiss Walb (форелевое хозяйство, Онежское озеро). У каждой особи определяли длину тела по Смиту (AC), общий вес (массу) тела. Общую активность ферментов лактатдегидрогеназы (ЛДГ, 1.1.1.27), глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ, 1.1.1.49) и 1-глицерофосфатдегидроге­назы (1-ГФДГ, 1.1.1.8) определяли в мышцах и печени рыб по общепринятым методикам (Кочетов, 1980).

Тотальную РНК выделяли из белых мышц с помощью набора «для выделения тотальной РНК Yellow Solve» (Клоноген, г. Санкт-Петербург). ДНК белых мышц выделяли методом Альанаби и Мартинеса (Aljanabi and Martinez, 1997). Концентрациию РНК и ДНК определяли спектрофотомет­рически. Уровень экспрессии генов тяжелой цепи миозина и цитохром с оксидазы определяли в бе­лых мышцах методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР). Тоталь­ную РНК обрабатывали ДНКазой (10 ед/мл) (Силекс). Комплементарную ДНК (кДНК) синтезиро­вали из препарата тотальной РНК с использованием MMLV-обратной транскриптазы и случайных гексонуклеотидов (набор «Синтез первой цепи ДНК», Силекс). Амплификацию проводили на при­боре i-Cycler с оптической приставкой IQ5 (BioRad, США) с использованием реакционной смеси 2,5х для проведения ПЦР-РВ в присутствии интеркалирующего красителя SYBR Green I (Синтол). Праймеры для актина и тяжелой цепи миозина подбирали с помощью программы Beacon Designer 5.0. Последовательности праймеров следующие: миозин (MyHC) (GenBank Z48794) прямой 5'- GCTGAGAAGGACGAGGAGATG-3', обратный 5'- GCCTGCCTGTTGGAGTGG-3'; β-актин (GenBank AJ438158) прямой 5'-TGGACTTTGAGCAGGAGATGG-3', обратный 5'- TCGTGGATACCGCAAGACTC-3'. Последовательность олигонуклеотидов для амплификации гена цитохром с оксидазы (COX4): прямой 5'-TACGTGGGGGACATGGTGTT- 3', 5'-

CCCAGGAGCCCTTCTCCTTC -3'(Koltitz C. et al., 2008). Протокол ПЦР: денатурация ДНК при 95^оС 5 мин; повторяющиеся циклы (50): денатурация ДНК при 95^оС 20 с, отжиг праймеров при 59^оС по 30 с, элонгация ДНК при 72^оС по 30 с. После ПЦР проводили процедуру плавления фраг­ментов ДНК (с 59 до 95^оС с шагом 0,5^оС). Концентрацию матричной РНК в виде кДНК определяли по стандартной кривой. Уровень экспрессии исследуемых генов нормализовали по уровню экспрес­сии референсного гена β-актина. Данные выражались как отношение концентрации мРНК иссле­дуемого гена к концентрации мРНК β-актина, умноженное на константу (100) для удобства интер­претации данных.

Различия в активности ферментов и других показателей оценивали по критерию Т Стьюдента. Различия считали достоверными при р