ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Моноциты являются источником широкого спектра цитокинов, вовлеченных в воспалительный процесс. Под воздействием факторов окружающей среды происходит модификация секреторной активности моноцитов.
В частности, известно, что под действием эндогенного пуринового нуклеозида аденозина, высвобождающегося в повышенных количествах при повреждении ткани и в условиях гипоксии, профиль моноцитов претерпевает ряд изменений.Для оценки влияния аденозина на профиль моноцитов была проведена оценка иммунофенотипического, рецепторного и цитокиновго профиля моноцитов. Изучение дифференцировки моноцитов под влиянием аденозина проводили с использованием характеристических фенотипических маркеров моноцитов (CD14) и дендритных клеток (CDla, CD209). Установлено, что под действием аналога аденозина - 5’- N - этилкарбоксамидоаденозина происходит изменение пути дифференцировки моноцитов, а именно, аденозин-модифицированные моноциты приобретают иммунофенотип CDla"CD14+CD209+, отличный как от моноцитов (CDla"CD14+CD209), так и от незрелых дендритных клеток (CDla+CD14'CD209+) (рис. 49). Причем при увеличении концентрации NECA и времени культивирования (30 мкМ в течение 24 часов и 100 мкМ в течение 72 часов) определяется увеличение количества клеток с данным иммунофенотипом.
Для оценки ответа клеток на стимуляцию аналогом аденозина были изучены уровни экспрессии мРНК генов аденозиновых рецепторов (Al, A2A, А2В, АЗ). Показано, что стимулированные таким образом клетки характеризуются повышенным уровнем экспрессии A2A и АЗ аденозиновых рецепторов, способствующих, по данным литературы, приобретению моноцитами противовоспалительного фенотипа (рисунок 49).
Для изучения цитокинового профиля модифицированных аденозином моноцитов были определены уровни экспрессии мРНК генов цитокинов различной функциональной активности: влияющих на течение воспаления, процессы ангиогенеза, фиброгенеза, коллагеногенеза и эпителизации.
При стимуляции моноцитов аденозином наблюдается увеличение экспрессии мРНК генов цитокинов, реализующих свои эффекты преимущественно как в провоспалительных (IL1B, IL6, IL8), так и противовоспалительных реакциях (IL10). Также наблюдалось увеличение экспрессии мРНК генов факторов, стимулирующих ангио-, фибро-, коллагеногенез (FGFB, VEGF) и угнетающих данные процессы (IPlO) (рисунок 49).Методом иммуноферментного анализа были определены концентрации секретируемых аденозин-модифицированными моноцитами цитокинов. Под действием NECA наблюдалось значительное увеличение уровня секреции сосудисто-эндотелиального фактора роста. Для остальных цитокинов уровень белкового продукта в кондиционной среде клеток имел лишь тенденцию к изменению. Однако необходимо отметить, что секреция цитокинов может происходить не только сразу после процесса транскрипции и наработки соответствующего экспрессионного продукта, но и в ряде случаев только после активации определенных рецепторов (TLR, Fcy, цитокиновых рецепторов) [206]. Нехватка данных стимулов при культивировании модифицированных моноцитов in vitro приводит к отсутствию секреции цитокинов и сохранению уровня белкового продукта в кондиционной среде после стимуляции клеток. Тем не менее можно предположить, что, попадая в очаг повреждения, моноциты начнут взаимодействовать с окружающими клетками, произойдет активация рецепторов, следствием чего будет являться выброс цитокинов, стимулирующих процессы регенерации.
Рисунок 49 - Схема влияния стимуляции аденозиновых рецепторов аналогом аденозина NECA на профиль моноцитов на основании данных литературы и результатов собственных исследований (выделены жирным шрифтом).
Обозначения:
> - стимулирующее влияние
- ингибирующее влияние
Таким образом, можно предположить, что аденозин- модифицированные моноциты за счет секреции широкого спектра функционально разнонаправленных цитокинов могут участвовать в реакциях воспаления, ангиогенеза, фиброгенеза, коллагеногенеза, эпителизации, являющихся составляющими регенеративного процесса (таблица 4).
Для подтверждения выдвинутой гипотезы в проведенном нами эксперименте был изучен регенеративный потенциал аденозин- модифицированных моноцитов на модели ожоговой раны у крыс. По данным планиметрического анализа введение вокруг раны аденозин-
модифицированных клеток приводит к более быстрому заживлению дефекта кожных покровов. При анализе гистологических образцов установлено отсутствие каких-либо отклонений в процессе заживления у животных после введения аденозин-модифицированных моноцитов. Только в данной экспериментальной группе в дерме сохранились волосяные фолликулы, что свидетельствует не только о заживлении раны в ускоренные сроки, но и о восстановлении нормальной структуры кожи.
Таким образом, проведенное исследование имеет несколько важных научных результатов. Во-первых, в рамках работы получены новые данные фундаментального характера об иммунофенотипических характеристиках моноцитов в условиях стимуляции аналогом аденозина NECA. Во-вторых, изучен профиль экспрессии генов аденозиновых рецепторов при стимуляции моноцитов NECA. В-третьих, установлены особенности цитокинового профиля аденозин-модифицированных моноцитов при различных режимах культивирования. В-четвертых, показан регенеративный потенциал стимулированных аденозином моноцитов на модели регенерации ожоговой раны.
Таблица 4
Возможные механизмы влияния цитокинов, секретируемых аденозин- модифицированными моноцитами, на процессы регенерации ожоговой раны на основании данных литературы и результатов собственных исследований
Продолжение таблицы 4
На основании полученных данных можно заключить, что при стимуляции моноцитов NECA происходит изменение фенотипа и цитокинового профиля моноцитов, вследствие чего клетки приобретают высокий регенеративный потенциал. Это позволяет рассматривать аденозин- модифицированные моноциты в качестве потенциального стимулятора восстановления структуры и функции поврежденных тканей.