Люминесцентная микроскопия

Этот метод применяется для наблюдения флюоресцирующих (люми- несцирующих) объектов. Люминесценция (или флюоресценция) - это явле­ние, когда некоторые вещества под влиянием падающего на них света испус­кают лучи с другой (обычно большей) длиной волны.

Различают собственную (первичную) и наведенную (вторичную) флюоресценцию. При первичной флюоресценции исследуемый объект со­держит вещества, способные флюоресцировать при освещении их ультра­фиолетовыми лучами. Большая часть объектов не обладает собственной флюоресценцией, поэтому при люминесцентной микроскопии их обрабаты­вают красителями (флюорохромами), способными флюоресцировать. Кроме того, вещества, имеющие определенный цвет при обычном освещении, при освещении ультрафиолетовыми лучами приобретают совершенно другой цвет. Объект невидимый в ультрафиолетовом свете, может приобрести яркий блеск после обработки его флюорохромом. Флюорохромы связываются с нуклеиновыми кислотами или белками и образуют прочные комплексы, ко­торые светятся в люминесцентном микроскопе желто-зеленным, оранжево­красным, коричнево-красным цветом. Сила их света бывает различной, но чаще всего она невелика, поэтому люминесцентную микроскопию следует проводить в затемненном помещении. В качестве флюорохромов используют аурамин, акридин желтый, корифосфин, флюоресцеинизотиоцианат (ФИТЦ).

Препарат для люминесцентной микроскопии готовят обычным спосо­бом, фиксируют в ацетоне или этаноле 5-10 мин и наносят на него флюоро­хром на 20-30 мин. После этого препарат промывают проточной водой 15-20 мин, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Установка для люминесцентной микроскопии в видимых лучах состоит из яркого источника света и биологического микроскопа (рис. 7).

Рис. 7. Люминесцентный микроскоп

В люминесцентном микроскопе свет от мощного источника проходит через два светофильтра: первый задерживает свет перед образцом и пропус­кает свет длины волны, возбуждающей флюоресценцию образца, обработан­ного флюорохромом; второй пропускает свет длины волны, излучаемой флюоресцирующим объектом и воспринимаемый глазом. Таким образом, флюоресцирующие объекты поглощают свет одной длины волны и излучают

в другой области спектра.

Люминесцентная микроскопия нашла широкое применение для визуа­лизации результатов иммунохимических реакций, основанных на специфиче­ском взаимодействии меченных флюоресцирующими красителями антител с антигенами изучаемого объекта. Антитела метят различными способами: флюорохромами (флюоресцеин, родамин и др.), при помощи ферментной ре­акции (пероксидаза хрена) или электронно-плотными частицами (ферретин, коллоидное золото).