1.2.7. ОНКОГЕНЫ НЕОПЛАСТИЧЕСКОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ. СЕМЕЙСТВО ГЕНА RAS

Одним из основных постулатов концепции онкогена, который установлен для всех исследованных опухолевых систем, свидетельствуют о том, что актив­ность онкогенов является необходимым условием для нсопластичсскот пре­вращения клеток.

Установлено, что транскрипционная активность онкогена, как правило, выше сю неопластической потенции, хотя на некоторых тест-системах наблю­дался противоположный эффект J Diamond A. et al., 19X4; Balmain А., 19X5). Из многочисленных работ, посвященных изучению транскрипционной активнос­ти онкогенов, видно, чго их число значительно колеблется даже в опухолях одного гистоіенсза, причем в процессе прогрессии опухоли оно пік же меняется (в метастазах может бьггь как больше, так и меньше активных онкогенов по отношению к клеткам первичного угла). Тем не менее, несмотря на явную противоречивость полученных данных, все же имеется общая закономерность функционирования онкогенов. Во-первых, в клетках злокачественных новооб­разований любою шетогенеза минимально число активных онкогенов состав- ляло два; во-вторых, все известные онкогены по их функциональной активнос­ти составляют три категории: постоянно транскрибирующиеся, непостоянно транскрибирующиеся и молчащие; в-третьих, представлены данные | Wasylyk С.

Показано, что постоянная экспрессия онкогенов неопластической тран­сформации в клетках первичных кулыур нс индуцирует ни их иммортализа­цию. ни неопластическую трансформацию и в то же время может вызывать нестабильное проявление признаков опухолевою фенотипа |Namba М. et al., I9X6J.

В настоящее время существует собственно лишь один способ, а именно метод трансфекции для выявления онкогенною эффекта онкогена. Причем этим методом можно определять только онкогены неопластической трансфор­

мации, т. с. гены, обусловливающие последнюю сталию опухолевой трансфор­мации при условии их действия только на иммортализированные клеточные линии, например мышиные клетки линии NIH/3T3. Однако следует отметить, что факты, полученные на иммортализированных клетках, всегда требуют большой осторожности вследствие высокой способности таких клеточных линий к спонтанной трансформации. Необходимо также в каждом экспери­менте исследовать несколько типов ДНК и клеточных контролен. Однако тем нс менее эти тест-системы удобны и вполне оправдывают себя С одной стороны, на таких клетках молекулярно-биологическими методами можно контролировать функционирование отдельных генов, а с другой — фенотипи­ческая трансформация клеток N1H/3T3 четко различима. Учитывая сложен­ное, следует обратить внимание на факт принципиальной важности, а именно: большинство онкогенов, как впоследствии и антионкогенов, первоначально было идентифицировано на уровне ДНК, а лишь затем исследовались функции их продуктов, что, естественно, имеет существенное значение для расшифров­ки механизма трансформации.

Итак, онкогены неопластической трансформации могут трансформиро­вать в опухолевые только иммортализированные клетки, причем такая спо­собность достоверно доказана для онкогенов семейства ras: c-Ha-ras I, c-Ki-ras2, c-Nras.

Методом трансфекции установлено, что ДН К различной тканевой природы в К)—20% случаев оказывают трансформирующий эффект, который, как правило, обусловливался трансформирующими последовательностями онко­гена ras | Balmain А., 1985 J. Поскольку ген ras является наиболее часто экспрес­сирующимся онкогеном в опухолевых клетках любого гистогенеза, есть осно­вания предполагать, что с началом постоянного его функционирования клетка приобретает самоподдсрживаютуюся автономность. Однако, согласно одноз­начным данным литературы, опухолевая трансформация первичных клеток грызунов одним онкогеном c-Ha-ras (либо любым другим геном неопластичес­кой трансформации, например га Г или В lym) невозможна, хотя морфологичес­ки нормальные, но иммортализированные клетки мышей линии N1H3T3 легко трансформируются тем же геном ras JDerC. et al., 19X2; Tsunokawa J. ct al., 1984; Paul D., 1985J.

Хорошо известно, что активировать онкогены ras могут специфические изменения в виде точечных мутаций, возникающих в любом из кодонов (12, 13, 59, 61,63, 116, 119 иди 146), или, напротив, в виде амплификации исходного гена в 5—50 раз и больше, а также за счет изменения тандемных повторов в 3 - фланкирующем районе или трансдукций инсерционного мутагенеза и хромо­сомных транслокаций. Кроме тот, онкогены ras, как правило, тпомстилиро- ваны в трансформированных клетках, что также указывает на их активное состояние. Предполагают существование несколько точковых механизмов активации онкогенов ras, один из которых не изменяет конформацию белково­го продукта, выявляемого методом кругового дихроизма, а другие меняют структуру белка p21^r“(BosJ., 1988; Ischikawa J. ct al., 1988; Tadokoro К. et al., 19X9; Barbacid M., 1990). Отмечается, что все перечисленные механизмы активации протоонкогена ras в различных комбинациях способны вызывать более полный спектр опухолевых фенотипов [Namba Н. et al., 1990).

Активированные онкогены ras обнаружены в достоверно значимых пропор­циях во всех опухолях (индуцированных химическими канцерогенами, спон­танных первичных оггухолях человека и неопластически трансформированных

оиухол сродным и вирусами клеточных линиях и др.), но частота их присутствия и уровень экспрессии зависели от типа опухоли (Никифорова Н. Ф. и др., 1990; Bos J., 1988; Valencia A. et al., 1988; Ryle C.M. et al., 1989; Reynolds S.H. et al., 1989; Burgering B.M., Bos J.L., 19