ЗЛ Иммунофенотипическая характеристика аденозин- модифицированных моноцитов
Дифференцировка моноцитов в дендритные клетки существенно зависит от микроокружения [223]. Известно, что наличие в среде аденозина, сопровождающееся стимуляцией аденозиновых рецепторов, искажает дифференцировку моноцитов [42, 60].
Вследствие этого появляетсяотдельная популяция клеток, характеризующаяся измененной функциональной активностью и экспрессией поверхностных маркеров. Для изучения изменения иммунофенотипа моноцитов под влиянием NECA проводили оценку экспрессии ряда поверхностных маркеров, таких как CDla, CD 14, CD209. Определение поверхностных кластеров
дифференциации проводили через 24 или 72 часа от начала культивирования согласно выбранному режиму стимуляции. Для определения содержания популяции моноцитов определяли параметры бокового и переднего светорассеяния. Боковое светорассеяние (SSC) характеризует ганулярность клеток, а переднее светорассеяние (FSC) - размер клеток.
Через 24 часа после начала культивирования анализируемая популяция (имеющая средние показатели SSC/FSC, характерные для моноцитов) составляла 70,03% клеток (64,27 - 79,93) для нестимулированных культур и 70,09% клеток (61,45 - 83,89) после стимуляции 30 мкМ NECA (рисунок 4).
При культивировании в течение 72 часов по параметрам переднего и бокового светорассеяния анализируемые популяции составили 70,25% (68,67-79,50) и 71,18% (69,16-86,28) от общего количества событий для нестимулированной и стимулированной культур моноцитов соответственно (рисунок 5). По сравнению с 24 часовыми культурами анализируемые
популяции выросли в размере и увеличили количество гранул, что соответствует процессу дифференцировки.
Рисунок 4 - Распределение моноцитов по размеру (FSC) и гранулярности (SSC) через 24 часа после начала культивирования.
Примечание:
а - моноциты, культивируемые без стимуляции; б - моноциты, стимулированные ЗОмкМ NECA;
Rl - популяция моноцитов.
Рисунок 5 - Распределение моноцитов по размеру (FSC) и гранулярности (SSC) через 72 часа после начала культивирования.
Примечание:
а - моноциты, культивируемые без стимуляции б - моноциты, стимулированные IOOmkM NECA Rl- популяция моноцитов.
Анализ экспрессии CDla
Маркер CDla является членом семейства липидных антигенпрезентирующих молекул. CDla - один из основных маркеров, характеризующих процесс дифференцировки моноцитов в дендритные клетки. Клетку, экспрессирующую CDla можно отнести к незрелым дендритным. Пример распределения популяций клеток по экспрессии CDla при различных режимах стимуляции NECA представлен на рисунке 6.
Через 24 часа моноциты, стимулированные 30 мкМ NECA в течение 24 часов, несли на своей поверхности достоверно меньшее количество иммуннофенотипического маркера CDla - 18,07% (10,12-32,55), чем нестимулированная культура клеток - 29,55% (22,21-49,93) (р=0,0044).
Через 72 часа в нестимулированной культуре 44,74% клеток (36,74- 58,85) несли на своей поверхности CDla. В то же время только 11,85% (7,28- 51,17) моноцитов, стимулированных 100 мкМ NECA, экспрессировали данный маркер. Различия между группами статистически достоверны на уровне значимости р