Оценка гуморальных иммунных реакций

Для оценки гуморальных иммунных реакций в качестве антигенов применяли эритроциты барана (ЭБ) и брюшнотифозный Vi-антиген (Vi-Ag).

Использование данных антигенов позволяет рассмотреть влияние токсикантов на Т-зависимый (ЭБ) или Т-независимый (Vi-Ag) иммунный ответ в сравнительном аспекте, а также оценить роль Т- хелперов в реализации гуморального звена иммунного ответа [Утешев Б.

оценки действия химических соединений на систему иммунитета [Плецитый К. Д., 1985; Ройт А, 1991; Забродский П.Ф., 2000, 2006].

Исследование показателей Т-зависимого гуморального иммунного ответа проводят через 5, 8 и 13 суток (могут быть выбраны и другие сроки исследования) после острой интоксикации. Иммунизацию эритроцитами барана проводили путем их внутрибрюшинного введения в дозе 2-Ю⁸ клеток в 0,5 мл изотонического раствора хлорида натрия. Титры антител к ЭБ определяли в реакции гемолиза эритроцитов в присутствии комплемента. Все реакции проводились на стерильных пластиковых микропланшетах. Гуморальный иммунный ответ оценивают по отрицательному двоичному логарифму титра антител (ОДЛТА). Данный тест отражает способность органов системы иммунитета синтезировать IgM через 5 сут и IgG (преимущественно) через 8-14 сут [Ройт А., 1991; Casale G.P. et al., 1983]. Максимальный синтез IgG к ЭБ происходит через 14 сут после иммунизации.

Гуморальную иммунную реакцию к Т-зависимому и Т- независимому антигенам чаще всего оценивают через 4-5 суток после иммунизации по числу АОК в селезенке [Белокрылов Г. А. и соавт., 1980; Jeme N. К., Nordin А. А., 1963] после введения ТХВ с внутрибрюшинной иммунизацией крыс ЭБ в дозе 2Г0⁸ клеток в 0,5 мл изотонического раствора хлорида натрия и Vi-Ag в дозе 8 мкг/кг (использованный тест отражает синтез IgM В-клетками селезенки). АОК, характеризующие продукцию IgG, определяют в селезенке методом непрямого локального гемолиза в геле [Jeme N. К., Nordin А. А., 1963; Dresser D.W., Words Н.Н., 1965]. Данные литературы позволяют полагать, что данный метод характеризует преимущественно функцию Th2-лимфоцитов, так как ТЫ-лимфоциты обеспечивают возможность образования в этот период антителогенеза, кроме IgM, также и IgG2a, составляющих не более 20% от всех подклассов IgG [Ройт А. и савт., 2000].

Введение ТХВ проводят практически одновременно с иммунизацией. Кроме того, при исследовании Т-зависимого антителообразования по числу АОК в селезенке ксенобиотики вводят через 1 и 3 сут после иммунизации. При этом одновременное введение токсикантов с ЭБ и через 1 сут после иммунизации позволяет оценить индуктивную фазу гуморального иммунного ответа, а через 3 сут - продуктивную [Забродский П.Ф. и соавт., 2005; Deskotes J., 1986].

2.3.