Совместное определение метилцеллозольва (этилцеллозольва) и метоксиуксусной (этоксиуксусной) кислоты

На основании методики определения алифатических спир­тов в крови и моче, предложенной S. Т. Cheung (1987), и реак­ции метилирования кислот (межфазового катализа) нами раз­работан метод совместного определения МЦ (ЭЦ) и метоксиуксусной (этоксиуксусной) кислоты в биологических жидкостях.

Реакция основана на метилировании кислоты в водно-ме- танольной фазе под действием йодистого метила в щелочной среде. В качестве катализатора реакции используют тетраме- тиламмоний (ТМА).

К 0,5 мл плазмы крови (или мочи) добавляли 1,0 мл мета­нола, содержащего 6,5 мкмоль/л (59 мг%) ЭЦ и 7,8 мкмоль/л (81 мг%) этоксиуксусной кислоты в качестве внутреннего стандарта при определении МЦ и его метаболита. При опре­делении ЭЦ и этоксиуксусной кислоты использовали мета­нол, содержащий 7,9 мкмоль/л (61 мг%) МЦ и 9,8 мкмоль/л (89 мг%) метоксиуксусной кислоты.

После осаждения белков пробу центрифугировали 10 ми­нут со скоростью 3000 об/мин. К 0,5 мл супернатанта добав­ляли 100 мг ТМА, 0,2 мл 10% раствора аммиака и 0,1 мл йоди­стого метила (СН₃1). Пробу герметизировали и инкубировали в течение часа при температуре 80’ С, после чего производили определение МЦ, ЭЦ и дериватов соответствующих алкокси­кислот газохроматографическим методом (рис. 16).

Условия определения: газовый хроматограф, оснащенный ПИД; колонка стеклянная, длиной 3,3 м, внутренним диамет­ром 3 мм; насадка — Porapak-P, газ-носитель — гелий, со ско­ростью 30 мл/мин; температура колонки — 160’ С, испарителя и детектора — 180’С.

Идентификацию веществ производили по абсолютному времени удерживания. Расчет концентрации искомого веще­ства осуществляется по формуле:

где: Hj — высота (или площадь) пика исследуемого вещества (в мм); Н2 — вы­сота (или площадь) пика стандарта (в мм); К — поправочный коэффициент.

Рис. 16. Разделение метил- и этилцеллозольва, а также метиловых эфиров метокси- и этоксиуксусной кислот на Рогарак-Р:

1 — метилцеллозольв; 2 — этилцеллозольв; 3 — метоксиуксусная кислота; 4 — этоксиуксусная кислота)