Определение гликолевой кислоты в биологических объектах методом газовой хроматографии
Определение гликолевой кислоты осуществляли в виде ее метального производного (см. выше).
К 0,5 мл плазмы крови (или мочи) добавляли 1,0 мл метанола, содержащего 3,9 мкмоль/л (41 мг%) этоксиксусной кислоты, использовали в качестве! внутреннего стандарта.
Пробу центрифугировали 10 минут при 3000 об/мин. К 0,5 мл супернатанта добавляли 100 мг ТМА, 0,2 мл 10% раствора аммиака и 0,1 мл йодистого метила. Пробу герметизировали и инкубировали в течение часа при температуре 80° С, а затем производили определение деривата гликолевой кислоты газохроматографическим методом (рис. 17).
Рис. 17. Разделение метиловых эфиров кислот на Carbowax-20M:
1 — метоксиуксусной; 2 — этоксиуксусной; 3 — молочной;
4 — гликолевой; 5 — щавелевой
Условия определения: газовый хроматограф, оснащённый ПИД; колонка стеклянная, длиной 3,3 м, внутренним диаметром 3 мм; насадка —. 10% Carbowax-20M на Chromaton N-AW; газ-носитель — гелий, со скоростью 30 мл/мин; температура колонки — 100’ С, испарителя и детектора — 180’ С.
Идентификацию гликолевой кислоты производили по абсолютному времени удерживания. Расчет концентрации определяемого вещества осуществляли по формуле, приведенной выше.