ГЛАВА XX Применение реакции изоагглютинации при разрешении вопроса о спорном отцовстве Проф. Н. В. Попов и В. М. Смольянинов

Под именем агглютинации разумеется явление, когда микробы или другие клеточные элементы (кровяные тельца, сперматозоиды) в эмульсии при смешении с сывороткой склеиваются и образуются комочки.

Одним из типов меточной агглютинации под влиянием составных частей сыворотки является реакция гемоагглютинации, когда агглютинин находится в сыворотке крови одного человека или животного, а рецептор в красных кровяных тельцах (эритроцитах) другого человека.

В свое время при переливании крови от животного к человеку наблюдались осложнения, а часто и смерть человека в результате переливания. После того как было установлено, что смешение крови животный разных видов приводит к склеиванию эритроцитов (гетероагглютинация) и что это является естественной видовой реакцией, переливания крови от животного к человеку было оставлено, и перешли к переливанию крови от человека к человеку. Однако и здесь встретились в некоторых случаях такие же осложнения и смертельные исходы, как это было и раньше.

В результате изучения этого вопроса оказалось, что по реакции агглютинации возможно различать кровь разных людей (изогемоагглютинация, изоагглютинация).

Благодаря работам в первую очередь Ландштейнера, а затем и других авторов, было установлено, что по агглютинационным свойствам крови всех людей можно разделить на четыре основные группы.

Были предложены классификации с цифровыми обозначениями групп (Янский, Моос) и с формулами, отражающими физиологические особенности крови (Дунгерн - Гиршфельд, Ланд- штейнер ).

Реакция изоагглютинации, как теперь твердо установлено, основана на существовании двух свойств эритроцитов (агглютиногенов), подверженных агглютинации. Они обозначаются большими латинскими буквами А и В. В сыворотках же встречаются агглютинирующие свойства (агглютинины), которые рассматриваются, как антитела и обозначаются греческими буквами а и р.

Комби

нация

генов

RR

AR

AA

BR

BB

AB

Соответ

ствующая

группа

Оав

Аа

BP

ABra

}

}

Агглютинация происходит в том случае, когда при смешении эритроцитов и выворотки встречаются однозначные антитела и антигены, т.е. А и а, В, и р.

Описанные свойства сыворотки и эритроцитов появляются не одновременно. Агглютиногены (свойства эритроцитов) обнаруживаются уже у 4—5-месячных плодов и даже раньше, агглютинины же сыворотки появляются значительно позже, и их образование заканчивается на втором году жизни.

Антигены А и В являются наследственными признаками. Наследование их происходит по законам Менделя. Это положение является общепринятым.

Существует (несколько теорий способа наследования групповых свойств крови (Дун- герн - Гиршфельда, Бернштейна, Фурухаты, Кольцова, Бауэра), из них наиболее распространены теории двух пар аллеломорфов Дунгерн-Гиршфельда и теория одной множественной аллеломорфы геттингенского математика Бернштейна. Последняя теперь окончательно подтверждена и может служить основанием для исключения отцовства.

По теории Бернштейна групповые свойства зависят от трех наследственных факторов: А, В и R. Первые два обусловливают наличие антигенов А и В, фактор же R является скрытым и в определяемых свойствах крови не открывается. Таким образом может быть шесть комбинаций наследственных факторов (генов), дающих четыре группы:

При наследовании к ребенку один ген переходит от отца, другой от матери. Поэтому у ребенка не может быть любой группы, а его группа строго определяется группами родителей.

Из этой таблицы видно, что только брак А х В дает любую группу при других же браках возможность выявления групп у детей ограничена, что и является основанием для экспертизы отцовства.

Не трудно теперь вывести другую таблицу, по которой прямо можно заключить о том, кто может и кто не может быть отцом (см. табл. на стр. 113).

Таким образом из 14 комбинаций только в четырех нет исключаемых отцов. Эти четыре комбинации не уменьшают значения пробы, тем более, что две из них, в которых участвует группа матери АВ, очень редко встречаются, так как только 5—7% населения принадлежит к гр. АВ. Комбинации матери и ребенка с одновременным наличием групп О и АВ, т.е. у матери группа О, а у ребенка — АВ или наоборот, — невозможны, почему при наличии такого результата исследования возможно одно из двух: либо неправильное производство реакции, либо подмен ребенка.

Учение о группах крови имеет практическое применение в медицине еще и при переливании крови, пересадка органов и тканей, а в судебно-медицинской экспертизе также при индивидуальной диагностике кровяных пятен.

В последнее время метод исследования кровяных групп в алиментных делах приобретает все большее значение.

Последним постановлением, определяющим применение реакции изоагглютинации при спорном отцовстве в судебной практике РСФСР, является инструктивное письмо ГКК Верхсуда РСФСР по алиментным делам, опубликованное в «Судебной практике» № 14 от 6 августа 1929 г.

Ученый медицинский совет НКЗдрава РСФСР в своем заседании от 28 октября 1929 г. по вопросу о введении в судебно-медицинскую практику реакции изоагглютинации пришел к следующему заключению: 1) Реакцию изоагглютинации Ландштейнера считать допустимой в судебно-медицинской практике. 2) В настоящее время впредь до ознакомления всех судебно-медицинских работников с реакцией Ландштейнера ограничить ее применение в каждом отдельном случае с разрешения краевых или областных органов здравоохранения. 3) Ограничить применение указанной реакции лишь делами об исключении (а не об установлении) отцовства.

Необходимо внести определенную ясность в вопрос, что можно ожидать от групповой реакции крови в отношении спорного отцовства.

Реакция изогемоагглютинации имеет групповое, а не индивидуальное значение. С ее помощью можно только исключать отцовство предполагаемого лица в том случае, если его группа крови при сопоставлении с группами крови матери и ребенка не соответствует правилам наследования, приведенным в таблице.

При положительном результате эта реакция не имеет значения, т.е. нельзя утверждать на основании ее, что именно данный мужчина является отцом ребенка, так как любой другой мужчина, имеющий ту же группу крови, может быть отцом этого ребенка.

Германское законодательство в алиментных делах по отношению к экспертизе группового исследования крови ставит вопрос с такой формулировкой: «Действительно ли невозможно, чтобы данный мужчина мог произвести данного ребенка?».

Реакция изогемоагглютинации в целях исключения отцовства производится по предложению органов расследования и суда. Кровь для исследования должна быть взята у матери, ребенка и предполагаемого отца судебно-медицинским экспертом данного района, города и пр. Действуя на основании имеющейся у него инструкции, эксперт пересылает кровь для исследования в соответствующую судебно-медицинскую лабораторию: краевую, областную или в Центральный институт судебной медицины НКЗдрава.

При экспертизе крови в целях исключения отцовства следует стремиться к безусловной точности определения, поэтому необходимо употреблять двойной метод установления групп крови (по сыворотке и эритроцитам) и пользоваться методикой, предложенной Шиффом (реакция в пробирках).

В последние годы Ландштейнером и Левином, открыты новые индивидуальные свойства крови в эритроцитах — М и N. Они выявляются при помощи агглютинации, но готовых агглютининов в сыворотках крови других людей для выявления этих свойств не имеется, Поэтому такие агглютинины получают из кроличьей сыворотки путем предварительной обработки кролика впрыскиванием ему человеческих эритроцитов М или N (иммунизации кролика). Полученные агглютинины называются анти-М н анти-N. При наличии свойств М и N все люди делятся на три типа: М, N и MN. Людей с отсутствием и М и N не обнаружено. Свойства М и N находятся у людей и распределяются совершенно независимо от А и В. Они тоже являются строго наследственными субстанциями, причем каждому из них соответствует свой ген, почему наследование их проще, чем наследование А и В. Наследственные формулы их можно, не вдаваясь в детали генетики, обозначить формулами ММ, NN и MN. Ребенок от каждого из родителей получает по одному из двух генов. Отсюда легко предвидеть возможные комбинации: брак М * М, т.е. комбинация MM * ММ, дает детей только ММ. Брак М * N, т.е. комбинация MM * NN, может дать детей только MN. Таким образом здесь соотношения наследования несколько иные и более простые, чем у А и В.

Таблица наследования такова:

Брачные комбинации

М * M N * N M * N MN * M MN * N MN * MN

Типы детей

M

N

MN M, MN N, MN M, N, MN

Как видно, здесь наследование более ограничено; при составлении таблицы для исключения отцовства (опять-таки не установления) получаем:

Здесь также имеются две невозможные комбинации: мать М не может дать ребенка N ни при каком отце, а мать N не дает ребенка М, что ясно видно из сопоставления формул: MM * NN — только MN, а MM * MN — либо ММ, либо MN. B таких случаях тоже приходится думать или об ошибке при определении типа, либо о подмене ребенка.

В результате этих двух категорий индивидуальных наследственных признаков крови возможно довольно частое исключение неправильно указываемых отцов. В Германии, где обе реакции широко употребляются, эта возможность по обеим пробам определяется в 19%. У нас применение пробы на Ми N никакими правилами не регламентировано, и сама реакция, как требующая довольно сложной подготовки, производится только единичными лабораториями (Москва, Харьков, Ленинград). Во всяком случае сперва надо производить пробу по А и В и только в случае неудачи ее, при возможности, — пробу на М и N.

В самое последнее время для целей исключения отцовства предложены различия в группах А, так называемые подгруппы А1 и А2, А1В и А2В. Но пока их еще нельзя применять для судебных целей, тем более, что и характер самих различий окончательно не выяснен.

Теоретически на основании этих реакций можно было бы производить и экспертизу материнства, в случаях похищения или подмены ребенка. Практически же это почти невозможно, так как для этой экспертизы должен быть точно известен отец ребенка, чего обычно в подобных делах не бывает. Если имеются две родительских пары, оспаривающих ребенка, то тогда по группам иногда можно решить вопрос о том, от какой пары происходит ребенок. Но опять-таки должно быть совершенно несомненно, что у каждой матери только один указываемый мужчина мог быть отцом ребенка. Если отцы вообще не фигурируют в деле или сомнительны, то ответ можно дать только в тех редких случаях, когда возможность происхождения ребенка от данной женщины исключается независимо от отца (ребенок АВ от матери О, ребенок О от матери АВ, ребенок N от матери М и ребенок М от матери N).

Серологический метод определения отцовства и материнства по Цангемейстеру

Е. Е. Розенблюм

В июле 1929 г. известный недавно умерший ученый проф. Цангемейстер доложил Северо-германскому гинекологическому обществу о своем методе определения «отцовства» и «материнства».

Принцип, из которого исходит Цангемейстер, заключаете в том, что мать и дитя представляют собой два отдельных, индивидуально чуждых организма. Многочисленные исследования, начиная от открытых Гальбаном в сыворотке изоагглютининов и кончая реакциями Абдергальдена и Зель- гейма, показали, что мать и дитя, не взирая на весьма тесную биологическую связь, в серологическом отношении (т.е. по свойствам их сывороток) являются разными индивидами. Очень возможно, что это индивидуальное отличие зависит от свойств белка того и другого организма. Мы ведь знаем, что организм на парэнтеральное введение (т.е. помимо, желудочно-кишечного тракта) чуждого ему белка реагирует образованием антител, доказать которые возможно при помощи преципитиновой реакции. А если между матерью и ребенком действительно отмечается серологическое отличие, базирующееся на разнице белков, то можно допустить, что во время беременности образуются антитела, для доказательства которых наши современные методы недостаточно точны. Допуская взаимную иммунизацию матери и плода во время беременности, Цангемейстер доискивался серологически это доказать. После тщательных, продолжительных экспериментов при помощи особой аппаратуры он нашел, что смесь в известной пропорций сыворотки матери и плода реагирует специфически. При дальнейших экспериментах им был установлен поразительный факт, что та же реакция получается, когда смешивается детская и отцовская сыворотки.

С иммунно-биологической точки зрения этот факт поддается об’яснению, лишь если допустить возможность внутриматочного перехода иммунных веществ на плод, тех иммунных веществ, которые материнский организм вырабатывает, реагируя таким образом против белка отцовской спермы. Подобного рода предположение вполне допустимо согласно известным данным об ан- тиспермальных антителах, вырабатываемых материнским организмом (Левицкий).

Метод Цангемейстера, разработанный при ближайшем участии Кенигсбергского физика проф. Ганса, основан на изменении мутности сыворотки, когда она представляет родственную смесь, и на ее устойчивости в обратном случае.

Исследовать и установить изменчивость мутности можно только очень тонкими физическими методами: 1) ступенчатым фотометром Цейса (суб’ективный метод) и 2) ультрамикроскопом (фотографический метод).

Последний метод разработан с тем, чтобы исключить суб’ективное влияние, которому подвержена оценка степени помутнения сыворотки, когда смесь рассматривается в фотометре простым глазом. Совместно с Виггером Цангемейстеру удалось устранить это при помощи ультрамикроскопа; последний дает возможность получать ряд серий фотографических снимков, которые сравниваются с одновременно фотографируемой контрольной смесью, остающейся неизмененной. Эта реакция, испытанная не только на смеси сыворотки ребенка и отца, и ребенка и матери, но и на сыворотках разных животных, оказалось у человека, пока по крайней мере в высокой степени специфичной, а потому Цангемейстер нашел возможным применить ее для установления отцовства. Нельзя не обратить внимания, что на положительный результат реакции возраст ребенка не влияет. Реакция протекает одинаково энергично и резко независимо от того, взята ли сыворотка новорожденного или взрослого ребенка.

Сам Цангемейстер к моменту сделанного им впервые сообщения давал заключение на суде лишь в одном случае, в котором он при помощи своего метода отклонил отцовство. Он признает, что метод нуждается в дальнейших исследованиях, которые после его смерти продолжаются.

Не вдаваясь в подробности и в обсуждение по существу окончательно не выясненной сущности основного положения Цангемейстера, именно, что реакция действительно является следствием иммунизации во время беременности, можно признать, что метод этот заслуживает внимания. Число опубликованных исследовательских работ еще не достаточно велико, чтобы в окончательной форме судить о возможности ее широкого применения. Для проверки этой новой реак-

ции требуется точное знание методики, так как источники ошибок, несмотря на кажущуюся простоту, по мнению работавших с ней, имеются. Лишь после безупречно проведенных проверочных экспериментов можно будет до аналогии с изоагглютинацией окончательно судить о ее значении и практической пригодности.